Ófrjósemisaðgerð í autoclave felur í sér þrjú aðgreind stig:
Loftfjarlæging: Á þessu upphafsstigi fjarlægir autoclave loft úr hólfinu. Tómarúmdæla sogar út loftið og skapar þannig lágþrýstingsumhverfi. Þetta skref tryggir að gufa komist í gegnum öll svæði á áhrifaríkan hátt og nái hleðslunni fyrir rétta dauðhreinsun.
Ófrjósemisaðgerð: Þegar loftið er fjarlægt nær hitastigið inni í autoclave réttu stigi. Mettuð gufa, sem myndast við þrýsting, drepur bakteríur, vírusa og aðrar örverur. Venjulegur hitastig fyrir dauðhreinsun er 121 gráður við þrýstinginn 1,1 kílógrömm/fersentimetra (kg/cm²) (jafngildir 15 pundum/fertommu (lb/in²)). Lengd autoclaving er mismunandi eftir rúmmáli álagsins en er almennt talið vera 15-20 mínútur.
Kæling/þurrkun: Eftir dauðhreinsun losnar gufan og autoclave kólnar niður. Þegar hitastigið er öruggt er hurðin opnuð og sótthreinsuðu hlutirnir eru tilbúnir til notkunar.
Árangursrík flutningur lofts, rétt staðsetning á hlutum og nægilegur hitunartími skipta sköpum fyrir árangursríka ófrjósemisaðgerð.