Litrófsmælar hafa orðið venjubundnir verkfæri í nútíma sameindalíffræði rannsóknarstofum. Oft notað við kjarnsýru, magn próteina og magngreining á vaxtarþéttni baktería.
Einföld meginregla litrófsmælir
Litrófsmælirinn notar ljósgjafa sem getur myndað margar bylgjulengdir og fer í gegnum röð litrófsgreiningartækja til að mynda ljósgjafa með ákveðinni bylgjulengd. Eftir að ljósgjafinn hefur farið í gegnum sýnið sem á að prófa frásogast hluti ljósgjafans og frásog sýnis er reiknað út og umbreytist þar með í sýnisstyrk. . Upptaka sýnisins er í réttu hlutfalli við styrk sýnisins.
Magngreining á kjarnsýrum
Mæling kjarnsýra er algengasta aðgerð litrófsmælisins. Oligonucleotides, single-strand, tvístrengdu DNA og RNA er hægt að magngreina í jafnalausn. Uppsogstoppur hæsti frásogstopp kjarnsýru er 260 nm. Sameind samsetningar hverrar kjarnsýru er mismunandi, svo umbreytingarstuðlarnir eru mismunandi. Til að mæla mismunandi tegundir kjarnsýra skaltu velja samsvarandi stuðla fyrirfram. Til dæmis samsvarar frásog 1 OD við 50 μg / ml af dsDNA, 37 μg / ml af ssDNA, 40 μg / ml af RNA og 30 μg / ml af Olig. Upptöku frásogsins eftir prófuninni er umbreytt með ofangreindum stuðlum til að fá samsvarandi sýnisstyrk. Veldu rétt aðferð áður en prófun er gerð, sláðu inn rúmmál stofnlausnarinnar og þynningarefnisins og prófaðu síðan auða og sýnislausnina. Tilraunin var þó ekki alltaf slétt. Óstöðugur aflestur getur verið mesti höfuðverkurinn fyrir tilraunarmanninn. Tæki með meiri næmni sýna meiri svif í frásogi.
Reyndar leyfa hönnunarreglan og vinnureglan litrófsmælisins frásogið að vera breytilegt innan ákveðins sviðs, það er, að tækið hefur ákveðna nákvæmni og nákvæmni. Til dæmis er nákvæmni Eppendorf Biophotometer ≤1,0% (1A). Niðurstöður slíkra margra prófa eru mismunandi milli um það bil 1,0% af meðaltali og eru eðlilegar. Að auki er það einnig nauðsynlegt að huga að eðlisefnafræðilegum eiginleikum kjarnsýrunnar sjálfrar og sýrustigs jafnalausnarinnar sem kjarnsýran er uppleyst, jónstyrkur osfrv .: Þegar jónastyrkur er of hár meðan á prófinu stendur, lestrarvaktir, svo það er mælt með því að nota ákveðið pH gildi og lágan jónstyrk. Buffarar, svo sem TE, koma stöðugleika í lestur. Þynningarstyrkur sýnisins er einnig þáttur sem ekki er hægt að horfa framhjá: vegna óhjákvæmilegrar nærveru sumra fínna agna, einkum kjarnsýrusýna, í sýninu. Tilvist þessara litlu agna truflar niðurstöður prófsins. Til þess að lágmarka áhrif agnanna á niðurstöður prófsins þarf frásog kjarnsýrunnar að vera að minnsta kosti meira en 0,1 A og frásogið er helst á milli 0,1 og 1,5 A. Innan þessa sviðs er truflun á agnir eru tiltölulega litlar og útkoman er stöðug.
Þetta þýðir að styrkur sýnisins ætti ekki að vera of lágt eða of hátt (utan prófssviðs ljósmælisins). Að lokum ættu rekstrarþættirnir, svo sem blöndun, að vera nægir, annars er frásogargildið of lágt, jafnvel neikvætt gildi; blandan getur ekki verið til loftbólur, auða vökvinn hefur ekkert svifefni, annars rekur lesturinn harkalegur; Nota verður sömu kúvetu til að prófa auða og sýnishorn Annars er styrkur munur of mikill; umbreytingarstuðullinn og styrkur einingarinnar er valinn stöðugt; ekki er hægt að nota kúvettuna með glugganotkun; rúmmál sýnisins verður að ná lágmarksrúmmáli sem kúvettan krefst.
Til viðbótar við kjarnsýrustyrkinn sýnir litrófsmælirinn einnig nokkur mjög mikilvæg hlutföll sem gefa til kynna hreinleika sýnisins, svo sem hlutfallið A 260 / A 280, notað til að meta hreinleika sýnisins vegna þess að frásogstopp próteinsins er 280 nm. Hreint sýni með hlutfallið hærra en 1,8 (DNA) eða 2,0 (RNA). Ef hlutfallið er lægra en 1,8 eða 2,0 bendir það til þess að prótein eða fenól efni eru til staðar. 230 gefur til kynna að einhver mengun sé til staðar í sýninu, svo sem kolvetni, peptíð, fenól osfrv., Og hlutfall hreinnar kjarnsýrunnar A 260 / A 230 er meira en 2,0. 320 greinir grugg lausnarinnar og annarra truflunarþátta. Fyrir hrein sýni er A 320 yfirleitt 0.
Hangzhou Sumer Instrument Co, Ltd
Bæta við: No.168 Wuchang Ave., Yuhang District, Hangzhou 310023, Kína
TEL: + 86-571-88739859
Sími: +8618658504900
Netfang: info@sumerlab.com
Vefur: sumerinstrument.com