Kynning á meginreglunni og notkun almennra íhluta litrófsmæls

Litrófsmæli er mikið notað í líffræðilegum, efnafræðilegum, klínískum og umhverfisrannsóknum.
Litrófsgreining mælir hversu mikið ljós efni kemst í gegnum með því að koma ljósgeisla í gegnum sýnishorn í litrófsmæli.
Með því að mæla ljósstyrkinn sem greint er, er hægt að nota aðferðina til að ákvarða styrk leysts í sýninu.
Hugmyndin um litrófsgreiningar
Geislinn sem sendur er til sýnisins samanstendur af ljóseindargeisli.
Þegar ljóseindirnar hittast sameindirnar í sýninu geta sameindirnar tekið í sig nokkrar þeirra, dregið úr fjölda ljóseindir í geislanum og dregið úr styrk skynjunarmerkisins.
Flutningur er hluti af ljósinu sem fer í gegnum sýnið. Það er skilgreint sem ljósstyrkur sem fer í gegnum sýnishornið við ljósstyrkinn sem átti sér stað.
Uppsogið er þvert á flutninginn, sem samsvarar magni mælt með litrófsmælinum.
Samkvæmt frásoginu er hægt að ákvarða styrk lausnarsýnis út frá frumvarpi Lambert lögum sem sýnir að það er línulegt samband milli frásogs og sýnisstyrks. Samkvæmt lögum um bjór Lambert er frásog afurð frásogstuðullinn, sem er mælikvarði á það magn ljóss sem frásogast með leysi á tiltekinni bylgjulengd og fjarlægðinni sem ljós fer í gegnum. Sýnishorn eða ferðalengd og þéttni í leysi. Almennt er markmiðið með því að mæla frásog að mæla styrk sýnisins.
Íhlutir litrófsmælir
Hver litrófsmælir samanstendur af ljósgjafa, samstillingu (linsu eða fókusbúnaði til að senda sterka og beina geisla), einlita til að aðgreina geisla með mismunandi bylgjulengdir og lengdaval til að velja öldu eða gróp viðkomandi bylgjulengdar. Bylgjulengd ljóssins sem notuð er í litrófsmælinum sem kynnt er í þessu myndbandi er á bilinu útfjólublátt og sýnilegt ljós. Litrófsmælirinn inniheldur einnig sýnihaldara, ljósnemann og skjá sem sýnir niðurstöður skynjarans.
Nýjasta litrófsmælirinn er beintengdur við tölvu þar sem hægt er að stjórna tilraunaþáttum og sýna niðurstöðurnar.
Starfsregla litrófsmælir
Þegar litrófsmæling er framkvæmd er mikilvægt að gera viðeigandi varúðarráðstafanir, svo sem að vera með hanska, eftir því hvaða líffræðilega eða efnafræðilega lausn þú notar.
Kveiktu á tækinu og leyfðu lampa og rafeindatækni að hitna áður en þú mælir UV-Vis litróf sýnisins.
Undirbúið auða sýnishorn af sömu lausn með sama pH og svipaðan jónstyrk, en án íhlutanna sem á að greina; þar sem kúvetta og leysir geta dreift ljósi er nauðsynlegt að greina sýnið.
Hefðbundinn litrófsmælisýnishornið er hannað til að geyma plast- og kvarsskálar. Pippettu upprunalegu lausnina í skál.
Eftir að þú hefur þurrkað fingraför og skvett þeim utan á skálina, settu kúvettuna rétt í sýnihaldarann ​​og lokaðu hurðinni á lokinu.
Gleymdu aldrei að loka hurðinni því UV geislun frá opnum litrófsmæli getur skemmt augu og húð.
Forritaðu æskilegu bylgjulengd eða bylgjulengdarsvið sem verður sent til sýnisins. Þetta fer eftir bestu bylgjulengdinni sem íhluturinn sem er greindur getur tekið í sig. Vélin er síðan núllstillt með því að mæla auða sýnið, sem dregur frásog botnsins vegna sýnishornsins.
Það fer eftir gerð litrófsgreiningar tilraunar sem þú ert að gera, það getur verið nauðsynlegt að búa til staðalferil fyrir sýnatöku, þar sem hægt er að ákvarða styrk efnasambandsins sem greint er í sýninu.
Leyfið sýninu að ná réttu hitastigi og blandið varlega til að forðast að koma loftbólur í loftið. Síðan má bæta sýninu beint í skálina inni í vélinni og hægt er að gera lestur.
Eftir að sýnið hefur verið mælt fyrir frásog er tilraunin reiknuð rétt; til dæmis til að ákvarða styrk eða ensímvirkni.
Notkun litrófsmælis
Ein algengasta notkun litrófsmælisins er að mæla þéttleika frumna. Hægt er að nota frumuþéttnimælingu til að framleiða lógaritmískan vaxtarferil baktería, en þaðan er hægt að ákvarða ákjósanlegan tíma fyrir samþættingu raðbrigða próteina.
Litrófsmælirinn er einnig hægt að nota til að mæla efnaviðbragðshraða. Í þessari útfærslu er frásogið notað til að fylgjast með ensímviðbrögðum, sem hverfa með tímanum í gegnum millihvarf 452nm. Hægt er að reikna hraða þessa ensímstigs með því að passa gögnin við viðeigandi jöfnu.
Innleiðing á ör litrófsmæli útrýmir þörf sýnishafa. Þessir litrófsmælar nota yfirborðsspennu til að viðhalda sýninu.
Örverndarmælikvarði er besti kosturinn til að mæla massa og styrk litla og dýrra sýna, svo sem lífmolekúla, þar á meðal próteina og kjarnsýra.
Upptaka próteina við 280 nm veltur á innihaldi arómatískra hliðkeðju sem finnast í tryptófan, týrósíni og fenýlalaníni, svo og disúlfíðbindingu milli cysteínanna tveggja.
Hægt er að ákvarða styrk próteina með frásogi þess við 280 nm og frásogstuðul, sem byggist á samsetningu amínósýra.
DNA og RNA hafa hámarks frásog við 260 nm, þar sem hægt er að ákvarða styrk þeirra. Einnig er hægt að meta hreinleika kjarnsýra út frá hlutfalli frásogsmælinga og sértækra bylgjulengdum.