Spectrophotometric litametric prótein magnification
Prótein eru yfirleitt blöndu af próteinum. Litrófsmælingar eru byggðar á innihaldsefnum próteina: Amínósýrur (td tyrosín, serín) hvarfast við viðbótar litningarefni eða litarefni til að framleiða lituð efni. Styrkur lituðu efnisins er í beinum tengslum við fjölda amínósýra sem próteinið bregst við og endurspeglar þannig próteinþéttni.
Litametrísk aðferð
Það eru nokkrar aðferðir eins og BCA, Bradford og Lowry.
Lowry aðferðin: Byggt á elstu Biuret viðbrögðum og bætt. Próteinið bregst við Cu2 til að framleiða bláa viðbrögð. Hins vegar er Lowry aðferðin næmari en Biuret. Ókosturinn er nauðsyn þess að bæta í röð nokkrar mismunandi hvarfefni; viðbrögðin taka langan tíma; er næm fyrir prótein efni; Prótein sem innihalda EDTA, Triton x-100 og ammoníumsúlfat eru ekki hentugur fyrir þessa aðferð.
Bicinchoniinin sýru próf: Þetta er nýrri, næmari próteinagreining. Próteinið, sem á að greina, hvarfast við Cu2 í basískri lausn til að framleiða Cu, sem myndar chelat með BCA til að mynda fjólublátt efnasamband með frásogstopp við 562 nm. Línulegt samband milli styrkleika þessa efnasambands og próteinsins er sterkt og efnasambandið sem myndast eftir hvarfið er mjög stöðugt. Í samanburði við Lowry aðferðina er aðgerðin einföld og næmi er hátt. Hins vegar, líkt og Lowry aðferðin, er það næm fyrir truflunum á próteinum og hreinsiefnum.
Bradford aðferðin: Meginreglan um þessa aðferð er sú að próteinið bregst við Coomassie Brilliant Blue til að framleiða lituðu efnasamband sem gleypir við 595 nm. Mesta eiginleiki hennar er næmi hennar, sem er 2 sinnum hærra en Lowry og BCA. Það er einfaldara og hraðari. Það krefst aðeins ein tegund af hvarfefnaefnum. Efnasambandið getur verið stöðugt í 1 klukkustund til að auðvelda niðurstöðuna; Samræmi við Lowry, BCA hvarfast við afoxunarefni (td DTT, merkaptóetanól) samhæft. Hins vegar er það enn viðkvæm fyrir þvottaefni. Helstu galli er að mismunandi staðlar geta leitt til mikils munurs í niðurstöðum sömu sýnisins og ekki sambærilegar niðurstöður.
Sumir vísindamenn sem verða fyrir litamælingar í fyrsta sinn geta verið ruglaðir saman við niðurstöður hinna ýmsu litamælinga. Hvers konar aðferðir telur þú að rugla saman? Vegna þeirrar staðreyndar að hóparnir brugðist á mismunandi vegu og litningahóparnir eru ekki þau sömu, eru nokkrar aðferðir notaðar samtímis til að gera sýnistyrkur sama sýnisins ósamrýmanleg. Til dæmis, Keller et al. prófað prótein í brjóstamjólk og komist að þeirri niðurstöðu að styrkur mældur af Lowry og BCA var marktækt hærri en Bradford. Munurinn var þýðingarmikill. Jafnvel ef sama sýnið er ákvarðað er staðlað sýni sem valið er með sömu litametrískri aðferð ósamræmi og styrkurinn eftir prófið er einnig ósamræmi. Til dæmis, nota Lowry til að prófa próteinið í frumufjölguninni með BSA sem staðal, með styrk 1,34 mg / ml og globulín sem staðal með styrk 2,64 mg / ml. Þess vegna er æskilegt að vísa til efnasamsetningar sýnisins sem á að prófa áður en litametrísk aðferð er valin og finna efnafræðilega svipað staðlað prótein sem staðal. Að auki veldur litametrandi aðferðin til að mæla prótein oft vandamál þar sem gleypni gildi sýnisins er of lágt og leiðir til mikillar munur á mældri sýnistyrk og raunverulegan styrk. Lykilatriðið er að liturinn á mikilvægu hlutanum 1011 litrófsmælisins, kúvettið, hefur ákveðna helmingunartíma, þannig að hver litamælingaraðferð lýsir viðmiðunartímabilinu fyrir viðbrögð. Allar sýni (þ.mt staðalprófanir) verða að vera prófaðir innan þessa tíma. Ef tíminn er of langur, færðu gleypni gildi sem fæst og breytir styrkleikinn minnkar. Að auki eru hvarfhitastig, pH-gildi lausnarinnar, osfrv. Allar mikilvægir þættir sem hafa áhrif á tilraunina. Að auki er mjög mikilvægt að nota litamælingu í plasti. Forðist að nota kúvett úr kvarsi eða gleri vegna þess að liturinn eftir viðbrögð veldur því að kvars eða gler lituð og veldur ónákvæmri gleypni sýnisins.
Fyrirtækið sérhæfir sig í sölu á litrófsmælum , velkomnum viðskiptavinum sem þurfa að hafa samráð og kaup, við munum veita þér einlæga þjónustu og gæðavöru, auk lægra verðs.
Netfang: info@sumerlab.com
Vefur: sumerinstrument.com